主角格雷戈-豪斯醫生 (Dr. Gregory House，Hugh Laurie飾) 專攻傳染病及腎臟疾病，是普林斯頓大學附屬醫院的診斷醫學部主任。他帶領著他的醫療小組，專門解決各種各樣的疑難雜症，診斷其他醫院或者部門不能做出診斷的病人。除了每集講述一個病例之外，《豪斯醫生》還講述了很多發生在豪斯醫生以及他的團隊、同事工作生活中故事，包括友誼、感情等。
豪斯醫生由於右腿上出現過血管瘤，大面積肌肉被割除，必須依賴一根拐杖來行走，並且他長期處於腿部疼痛的狀態，經常大量服食止痛藥維可丁來緩解疼痛。他不穿白大褂，永遠一身褶皺襯衫牛仔褲運動鞋的打扮，用他的舌毒不停的去冒犯他的病人、同事甚至上司。他憤世嫉俗，認為每個人都在撒謊，喜歡盡最大可能避免與病人直接接觸，認為不跟病人接觸他們就沒辦法說謊。跟其他醫生不一樣，對豪斯來講，病人就是一個個謎團，他認為他的職責就是去解釋這些謎團，而不是治病救人。儘管如此，豪斯醫生依靠他超凡的思維和推理能力，以及豐富的學識和經驗，解決了一個又一個診斷方面的難題，挽救了無數的病人，也贏得了病人和同事的佩服、尊敬或者包容。
在前三季中，豪斯的醫療團隊裏有三位年輕出色的醫生。神經科醫生泰勒 -埃瑞克-弗曼 (Dr. Eric Foreman，Omar Epps飾) 是三人中比較敢以自己想法對抗豪斯的組員，經常和豪斯發生正面衝突，以至於到最後發展出曾經想要離開豪斯這個團隊的想法和舉動。主攻免疫學的阿麗森-卡梅倫醫生(Dr. Allison Cameron，Jennifer Morrison飾) ，作為這個醫療團隊中的唯一女性，曾為因容貌出色而被豪斯雇用感到忿忿不平，她富有同情心，有時會因為超強的正義感和道德感而做出另豪斯和其他同事反感的事情。心臟及急診科醫生羅伯特-蔡斯 (Dr. Robert Chase，Jesse Spencer飾) 操著一股澳大利亞口音，長著一頭金髮，是豪斯經常欺負的對象。不過蔡斯性格比較懦弱，對豪斯幾乎千依百順。
腫瘤學醫師詹姆斯-威爾森醫生(Dr. James Wilson，Robert Sean Leonard飾) 是豪斯醫生唯一的朋友。和豪斯醫生完全相反，威爾森醫生幾乎是一個人見人愛、同事和病人都非常尊敬的老好人。但這兩個性格迥異的人之間的友情，卻幾乎牢不可破。威爾森醫生為了讓他的好友豪斯醫生“改邪歸正”，可謂費盡心機，煞費苦心，手段層出不窮，可謂跟豪斯醫生是勢均力敵。
內科主任兼醫院行政主管麗薩-庫迪醫生(Dr. Lisa Cuddy，Lisa Edelstein飾) 是豪斯醫生的上司和“天敵”。兩人似乎天生的意氣不合，從未停止過為各種各樣的理由而爭吵。不過豪斯與麗薩之間也存在著另一種微妙曖昧的感覺，他們兩個人的關係似乎不僅僅是上下級那般簡單。